壳寡糖数均分子量测定

盐酸氨基葡萄糖和壳寡糖在碱性条件下与乙酰丙酮缩合生成生色原2-甲基-3-乙酰吡咯衍生物，生色原与对-二甲氨基苯甲醛生成红色化合物，在525nm波长下有最大吸收值。由于乙酰丙酮试剂与壳寡糖反应产生生色原时，涉及糖单位还原端基的开环反应，理论上寡糖与乙酰丙酮反应时，仅末端的糖单位参与反应，其余的糖单位不能开环，故不能与乙酰丙酮反应；因此，测得的分光光度值与壳寡糖的摩尔浓度应具有线性关系

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壳寡糖分子量测定

1　原理

2　仪器

2.1　分光光度计

3　试剂和溶液

3.1　无水乙醇

3.2　无水碳酸钠溶液: c(1/2Na2CO3)= 0.5 mol/L

3.3　盐酸氨基葡萄糖标准溶液(0.1mg/mL)：称取105℃干燥至恒重的盐酸氨基葡萄糖0.1 g（准确至0.0002g），置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，移取10.0mL，置100 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀。

3.4　乙酰丙酮试液：取乙酰丙酮3.5mL，加lmol/L无水碳酸钠溶液至50mL，混匀(临用前配制)。

3.5　对-二甲氨基苯甲醛溶液：称取对-二甲氨基苯甲醛0.8g，加无水乙醇15mL及盐酸15mL，摇匀(临用前配制)。

4　操作方法

4.1　标准曲线的绘制

分别量取盐酸氨基葡萄糖标准溶液0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分别置于具塞试管中，各加水至5.0mL，再加入乙酰丙酮溶液lmL，摇匀，置沸水浴中加热25min，取出，置冷水中冷却，再加对-二甲氨基苯甲醛溶液lmL，加无水乙醇至10mL，摇匀，60℃水浴中保温lh，放冷，以0管为空白，在525nm波长处测定吸收值，以标准系列盐酸氨基葡萄糖质量为纵坐标，吸收值为横坐标，绘制标准曲线。

4.2　试样分子量的测定

精密称取试样，用水溶解后定容于1000mL容量瓶中得试样溶液，准确移取试样溶液3.00 mL置于具塞试管中，按4.1中“用水稀释至5.00 mL”及以下步骤进行，测定吸收值。

根据测得的吸光值在工作曲线上，查得对应的盐酸氨基葡萄糖的质量。

4.3　结果计算

分子量(M，Da)按公式(5)计算。

m×(1-W) ×215.6×3

M = —————————— . . .………...……….….（5）

m5×1000

式中：

m —试样质量，单位为毫克(mg)；

W —试样水分含量；

m5 —由工作曲线查得的盐酸氨基葡萄糖的质量，单位为毫克(mg)；

4.4　允许误差

试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5%。

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壳寡糖,氨基葡萄糖

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